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原核表达蛋白纯化

大肠杆菌表达系统目前仍然是许多异源蛋白表达的选择，因为大肠杆菌操作简单、易于培养、获得的目标蛋白表达量大、成本较低以及实验周期短等优势。其主要流程包括:原核表达载体的构建一转化到高效表达的宿主菌一目的蛋白的诱导表达一细菌的扩大培养→制备细菌蛋白粗提物一目的蛋白质的纯化。

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GST Pull-down

Pul down 技术用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素、PolyHis-或 GST)，从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。通过 Pul-down 技术可以确定已知的蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系，从体外检测出蛋白相互作用关系。

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Co-IP 免疫共沉淀

免疫共沉淀技术(Co-lmmunoprecipitation，Co-IP)是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法，通过抗体和已知蛋白结合，从而捕获整个已知蛋白复合物，进而研究复合物中与己知蛋白存在相互作用的蛋白

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凝胶迁移实验(EMSA)

凝胶迁移或电泳迁移率实验(ElectrophoreticMobility Shift Assay,EMSA)是一种研究蛋白质和DNA序列相互结合的技术，蛋白质可以与生物素标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比蛋白质结合的探针在凝胶中泳动的速度慢。

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荧光素酶互补实验

荧光素酶蛋白被切成N端和C端2个功能片段，即NLuc和 CLuc。待检测的2个目标蛋白分别与NLuc和CLuc融合，如果2个目标蛋白相互作用，则荧火素酶的NLuc和CLuc在空间上会足够靠近并正确组装，从而发挥荧火素酶活性，即分解底物产生荧光。

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BiFC 双分子荧光互补实验

BiFC 技术是将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白融合表达。如果两个目标蛋白因物理相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成有活性的荧光基团而发出荧光。

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酵母双杂交

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测蛋白质相互作用的研究方法，因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点，现已被应用于多个研究领域。

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酵母单杂交

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具，被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控，如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析 DNA结合结构域信息等。

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酵母单双杂交建库及筛库

文库质粒、Pabai-bait诱饵载体构建、转化Y1HGold感受态进行毒性检测和自激活检测、将文库质粒转化Y1H Gold 中筛选阳性克隆

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